緩沖溶液是一類能夠抵制外界少量強酸和強堿的影響,維持體系pH值基本不變的溶液,其在生物化學的研究工作中有著極為重要的意義。常用的生物化學緩沖溶液有Tris(羥基甲基氨基甲烷)緩沖溶液、磷酸鹽緩沖溶液、有機酸緩沖液、硼酸鹽緩沖液、氨基酸緩沖液以及兩性離子緩沖液。
Tris初次引起廣泛注意的商業(yè)的成功之一是在魚的運輸時降低了魚的死亡率。在20世紀40年代,活魚是在盛有海水的桶里運往市場的。不幸的是,許多魚因C02的積聚使pH下降而致死。為了解決這個問題,在水中加入麻醉劑以便使魚的代謝活動降至最低限度,即使這樣也只能部分地得到緩解。這些麻醉劑對那些吃了這種魚的人到底有什么作用沒有記載。1958年,McFarland和Norris在海水中加入Tris穩(wěn)定其pH,的確降低了魚的死亡率。Tris有很高的緩沖能力,在水中溶解度高,對很多酶反應(yīng)是惰的,Tris也成了用于許多生化目的非常滿意的緩沖液,也是目前用于分子克隆中大多數(shù)酶反應(yīng)的標準緩沖液。
Tris有很高的緩沖能力,在水中高度溶解,對很多種酶反應(yīng)是惰性的。但是,Tris也有許多不足之處:
1、Tris的pKa值是pH8.0(20℃),這就意味著在pH值小于7.5和大于9.0時,Tris的緩沖能力是非常低的。
2、溫度對Tris的解離有顯著影響。溫度每升高l℃,Tris溶液的pH值則降低約0.03pH單位。例如,0.05mol/LTris在5℃,25℃,37℃時,其pH值分別為9.5,8.9和8.6?茖W文獻中Tris溶液的pH指的是在25℃測定的pH。配制Tris的貯存液時,最好是將pH調(diào)到所希望的范圍,然后使之冷卻至25℃再進行最終校正。
3、Tris與許多類型含有亞麻纖維接頭的pH電極起反應(yīng),顯然Tris能與亞麻纖維起反應(yīng)。這種影響表現(xiàn)在電動勢(emf)漂移,平衡時間加長。因此,具有亞麻纖維接頭的電極不能精確測定Tris溶液的pH值。只能使用具有陶瓷或玻璃接頭的電極測定Tris溶液的pH值。
4、濃度對Tris解離有顯著影響。例如,10mmol/L和100mmol/L Tris溶液的pH值會相差0.1pH單位,溶液的濃度越大則其pH值越高。
5、Tris對許多哺乳動物有毒性。
6、Tris作為伯胺,不能用于像戊二醛和甲醛這樣的固定劑。Tris也與乙二醛反應(yīng)。通常用磷酸鹽或MOPS緩沖液替代Tris,用于這些試劑。